猪肺泡巨噬细胞的免疫功能与分离培养及应用与质控要点！
小杨 / 2026-02-06 13:08:15
猪肺泡巨噬细胞（Porcine Alveolar Macrophages, PAMs）的核心知识，涵盖来源形态、免疫功能、分离培养、细胞系、应用与质控要点。
一、基本来源与形态特征
起源与分布：PAMs 来源于外周血单核细胞，迁移进入肺泡腔后在肺局部微环境中分化成熟；主要附着于肺泡表面、肺泡隔，是肺泡腔中数量最多的免疫细胞。
形态：光镜下呈圆形/椭圆形，表面有大量微绒毛与伪足；核偏位、胞质丰富，含大量溶酶体、吞噬体；体外贴壁后常伸出伪足呈不规则星状；标志物包括CD14、CD68、MAC387，可用于纯度鉴定。
二、核心免疫功能
吞噬与清除：识别并吞噬呼吸道细菌、病毒、尘粒与凋亡细胞，通过溶酶体降解；是肺先天免疫的第一道防线。
炎症调节与极化：可极化为促炎 M1 型（分泌 IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ）和抗炎 M2 型（分泌 IL-10、TGF-β）；表达 TLR、NLR 等模式识别受体，启动天然免疫并交联适应性免疫（呈递抗原给 T 细胞）。
分泌功能：释放趋化因子招募中性粒细胞、单核细胞；参与肺泡表面活性物质的稳态调控。
三、分离培养与常用细胞系
原代分离：常用气管灌洗法（冷无菌 PBS 反复灌洗肺脏，收集灌洗液离心）；贴壁纯化（2 h 贴壁后换液去除非贴壁细胞，纯度可达 90%+）；培养基多用 RPMI-1640+10% FBS + 双抗，37℃、5% CO₂培养；冻存常用 70% RPMI+20% FBS+10% DMSO，液氮长期保存。
经典细胞系：3D4/21，1998 年由 27 日龄长白猪 PAMs 经 SV40 大 T 抗原转化建立，可无限传代，常用于 PRRSV、ASFV 等病毒感染机制研究；为贴壁生长的巨噬细胞样细胞。
四、应用领域
猪呼吸道疾病研究：PRRSV、猪流感、非洲猪瘟、传染性胸膜肺炎的致病机制、药物筛选、疫苗评价。
兽药/抗炎药物研发：测试药物对 PAMs 炎症因子分泌、吞噬功能的影响。
比较免疫学：作为大型家畜巨噬细胞模型，对比人与小鼠巨噬细胞的功能差异。
五、关键操作与质控注意事项
灌洗需无菌操作，避免支原体/细菌污染；原代 PAMs 增殖能力有限，不宜长期传代，建议早期冻存。
鉴定指标：形态观察、CD68/MAC387 免疫荧光/流式、吞噬实验（如墨汁/荧光微球吞噬）、细胞存活率（台盼蓝拒染）。
极化实验可分别用 LPS+IFN-γ（M1）、IL-4+IL-13（M2）诱导。
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