细胞培养开始前的准备工作
微生物菌种查询网 / 2015-03-20 08:22:10
细胞培养开始前的准备工作
一、掌握相关知识：
1.学习细胞培养知识。
了解相关概念、方法，记住操作过程，观摩、参与实际操作。参考书《动物细胞培养-基本技术指南》（科学出版社）。
2.掌握无菌技术。
高压消毒实验用品：操作台上不是一次性的物品均需做灭菌处理，无法高压的物品应使用75%酒精消毒。
消毒操作间和操作台：使用75%酒精擦拭无菌间的墙面、地面，操作台的台面，孵箱，离心机等。操作前须用紫外线照射无菌间和操作台30分钟消毒。入无菌间须穿隔离服，戴手套、口罩、帽子。用75%酒精洗去手套上的滑石粉。
无菌操作：操作时应尽量接近酒精灯；拿取吸管时，避免接触其使用端；不要在开口器皿的上方操作；吸取不同液体应更换吸管。不能碰瓶口。万一碰到，更换吸管。
二、细胞培养用品的准备：
1无菌服装：包括消毒隔离服（有条件的实验室）或专用工作服（如白大褂）、无菌手套、无菌帽和口罩。除隔离服外，其他物品最好为一次性使用。
2.操作台：有条件的实验室可装备超净培养间，超净工作台和生物安全柜也可。所有物品除一次性物品外均需高压灭菌。有酒精灯及95%酒精、吸管或枪（枪头）、洗耳球、或电动移液器、小试管及试管架、培养瓶架、离心管、培养皿或培养瓶、计数板、废液缸。
3.仪器设备：相差显微镜、离心机、冰箱、水浴锅、无菌车及架子、废物桶、marker笔、灭菌擦手纸、75%酒精喷壶。
4.培养用液：PBS或D-hanks、胰酶等消化液（一般为0.05%或0.25%）、培养基（常用的有DMEM、R1640、MEN-EBSS、MEN-NEAA、F12、L15等）、血清（胎牛、小牛、马等）、生长因子、药物。培养用液需提前向公司订购，或咨询联系电话（010-51291224）。这些培养用液都有商业供应，不建议购买粉剂自己制备液体。
5.其他实验相关用品。一些非常规特殊用途的添加成分或实验用品，须向公司订购，因寄送有一定滞后性，建议在订细胞之前购买。
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